Protocoles expérimentaux :
Tout d’abord afin de pouvoir réaliser nos expériences, nous avons préparé une suspension de levures à 10g/L ainsi qu’un solution du glucose à 10g/L. Avant chaque manipulation nous nous sommes désinfecté les mains, nous portions nos blouses et manipulions sous hotte pour garder au maximum un environnement stérile pour ne pas perturber la croissance de nos levures. Avant chaque préparation de nos tube, nous avons mélangé, grâce a un agitateur magnétique notre solution de suspension de levures pour avoir une suspension homogène.
a) Préparation de la suspension de levure à 10 g/L
La solution de suspension de levures allait être utilisée pour préparer les six expériences.
Matériel : un bécher de 500 mL,une balance,un verre de montre,une spatule,Levures de boulanger ,eau distillée.
Protocole :Peser 5,0 g de levures et verser les dans un bécher de 500 mL, ajouter de l’eau distillée jusqu’à 500 mL.Ainsi nous obtenons 500 mL de suspension de levures à 10g/L.
b) Préparation de la solution de glucose à 10 g/
Nous avons donc choisi de faire varier deux paramètres influant sur la croissance des levures : nous avons placé des levures dans un milieu sans glucose et d’autres dans un milieu sans minéraux (KNOP : solution de minéraux) pour déterminer leur influence sur la croissance des Saccharomyces Cerevisiae. La solution de glucose va être introduite dans tout les erlenmeyers sauf dans celui ou nous testerons l’influence de son absence sur la croissance de la population de levure.
Matériel :Un bécher de 50 mL,une balance,un verre de montre,une spatule,glucose,eau distillée.
Protocole :Peser 0,35 g de glucose à l’aide de la balance, du verre de montre et de la spatule, verser le glucose peser dans le bécher de 50 mL et compléter avec de l’eau distillée jusqu’à la graduation de 35 mL.
c) Préparation du tube témoin :
Le tube témoin sera notre tube de référence pour les deux études que nous allons faire : étude de l’influence du substrat sur la croissance des levures et l’étude de l’influence de la température.
Matériel :Solution de suspension de levures,solution de glucose,solution de KNOP,pipette jaugée de 50 mL,pipette jaugée de 5 mL, agitateur magnétique,barreau aimanté, erlenmeyer de 100 mL.
Protocole :Sous hotte, agiter la suspension de levures à l’aide d’un barreau aimanté et d’un agitateur magnétique ; Verser dans l’erlenmeyers 50 mL de suspension de levure, 5 mL de solution de glucose ainsi que 2mL de KNOP.Etiqueter l’erlenmeyer et le laisser sous la hotte bouché avec du coton.
d) Influence du substrat
Préparation de deux autres erlenmeyers : un sans glucose et un autre sans KNOP afin de tester la croissance de nos levures dans ses conditions.
Matériel : influence du KNOP : (sans KNOP) : Solution de suspension de levures,solution de glucose,pipette jaugée de 50 mL,pipette jaugée de 5 mL,pipette jaugée de 2 mL,agitateur magnétique,barreau aimanté,erlenmeyer de 100 mL
Sous hotte, agiter la suspension de levure à l’aide d’un barreau aimanté et d’un agitateur magnétique ; verser dans l’erlenmeyer 50 mL de suspension de levure et 5 mL de solution de glucose. Compléter par 2mL d’eau distillée. Etiqueter l’erlenmeyer et le laisser sous la hotte boucher avec du coton.
Matériel : influence du glucose : (sans glucose) : Solution de suspension de levures,solution de KNOP,pipette jaugée de 50 mL,pipette jaugée de 5 et 2 mL,pipette jaugée de 2 mL,agitateur magnétique,barreau aimanté,erlenmeyer de 100 mL.
Protocole :Sous hotte agiter la suspension de levures (avec l’agitateur magnétique) ; verser dans l’erlenmeyer 50 mL de suspension de levures, ainsi que 2 mL de solution de KNOP et compléter le volume avec 5 mL d’eau distillée afin d’obtenir la même concentration en levures que dans les autres expériences. Etiqueter et boucher l’erlenmeyer avec du coton et le laisser sous la hotte à température ambiante.
e) Influence de la température
Préparation de quatre erlenmeyers que nous placerons ensuite dans différents milieux afin de tester l’influence de la température sur la croissance des levures. Nous prendrons pour tube témoin le même que celui qui a été utilisé pour l’étude de l’influence du substrat.
Matériel :Suspension de levures à 10 g/L,solution de glucose à 10 g/L,solution de KNOP, quatre erlenmeyers de 100 mL,pipette jaugée de 5 mL,pipette jaugée de 50 mL,pipette jaugée de 2 mL,agitateur magnétique,barreau aimanté ,deux bains-marie
Protocole :Sous hotte, verser dans chacun des 4 erlenmeyers, 50 mL de suspension de levure (au préalable agité grâce à un agitateur magnétique ainsi qu’un barreau aimanté), 5 mL de solution de glucose et 2 mL de solution de KNOP.Placer un erlenmeyers au frigo (température environ égale à 0°C), un second dans un bain-marie régler à 40°C, un troisième dans un bain-marie à 80°C et conserver le dernier sous la hotte à température ambiante.
Ne pas oublier d’étiqueter les erlenmeyers ainsi que de les boucher avec du coton pour éviter l’intrusion de corps étranger mais sans empêcher l’oxygène de pénétrer (deviendrait un milieu anaérobique et non aérobique).
Tableau récapitulatif des expériences :
| Experience 1 | Experience 2 | Experience 3 | Experience 4 | |
| Nom | 25°C témoin | 0 °C | 40°C | 80°C |
| Contenu | levures, glucose, KNOP | levures, glucose, KNOP | levures, glucose, KNOP | levures, glucose, KNOP |
| Milieu | température ambiante (environ 25°C) | frigo à environ 0°C | bain-marie à 40°C | bain-marie à 80°C |
| expérience 5 | expérience 6 | |
| Nom | KNOP | Glucose |
| Contenu | levure KNOP | levures glucose |
| Milieu | température ambiante | température ambiante |