Comptage des levures
Pour évaluer le nombre de levures dans chaque expérience, nous allons utiliser la technique directe de numération avec une lame de KOVA : c’est une lame plastique avec 10 grilles de numération gravées. Elle comporte 10 cupules individuelles avec grilles à quadrillage pour la numération. Chaque cupule comporte 9 grilles, chaque grille est subdivisée en 9 carrés.
Comme la concentration en levures allait être trop importante, il fallait d’abord faire une dilution à 1/10 la solution contenu dans chaque erlenmeyers.
Matériel :éprouvette graduée de 10 mL,pipette jaugée de 1 mL,agitateur magnétique,barreau aimanté,pipette,eau distillée,microscope.
Protocole :Agiter sous hotte le contenus des différents erlenmeyer à l’aide d’un agitateur magnétique et d’un barreau aimanté ; prélever ensuite 1 mL de la solution ainsi remuée et le versé dans l’éprouvette graduée ; compléter avec de l’eau distillée jusqu’à 10 mL. Une fois la dilution réalisée verser une goutte de cette nouvelle solution sur la lame de KOVA avec une pipette, la cupule se remplie entièrement par capillarité. (Photo prise. manipulation avec lame de KOVA.) Enfin compter au microscope au grossissement x 600 le nombre de levures par carré grâce aux microscopes.Pour éviter de manipuler de nombre trop grand nous avons conservé le nombre de levures présent dans un seule grille de chaque cupule. Ainsi nos mesures n’ont pas dépassées les 1340. Nos résultats sont donc un nombre de levures présent dans une grille.
Cependant afin d’avoir une idée de la concentration d’une population de levures dans un erlemeyer nous avons calculé le nombre de levures présentes en solution, de la préparation du tube témoin. À t=0 nous avons 160 levures.La notice d'utilisation des lames KOVA explique qu'il faut multiplier par 90 cette valeur pour obtenir le nombre de levures par microlitre. La suspension de levures diluée contient donc environ 160* 90 =14400 levures par µL. La suspension initiale en contient 10 fois plus, soit 144000 levures par µL. Dans le bécher de 57 ml, il y a donc au total : 144000 x 57000 = 3,249.109 cellules.